产品目录

RAPA HiFi DNA聚合酶，来源于高保真DNA聚合酶，并加入了增强的延伸结构，使其具有超保真性能（~280倍Taq）、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力，使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA、8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的延伸速度。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、强3'-5'的外切酶活性，产物为平末端。

• 超保真扩增：~280倍Taq的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
  
• 快速扩增：具有6kb/min的扩增能力。
  
• 长片段扩增：质粒、λDNA等简单模板可以有效扩增>20kb，基因组可以有效扩增>8kb，cDNA可以有效扩增>8kb。

• 当模板GC含量>65%时，请添加5×PCR增强剂。
  
• 当扩增片段<1kb时，延伸时间可直接使用15s，当扩增片段>5kb时，按照2～3kb/min的延伸时间进行设置，能获得更高的产量。
  
• 由于不同的PCR管其导热性能有所不同，通常PCR采用25μL体系可以获得更高的产量。

• 按下表配制反应体系并混合均匀：
  

  成分	用量
  2×RAPA HiFi Buffer	12.5μL
  RAPA HiFi DNA Polymerase(5U/μL)	0.25μL
  dNTP Mixture (10mM each)	0.25μL
  上游引物(10μM)	1μL
  下游引物(10μM)	1μL
  模板DNA	1～250ng
  ddH2O	至25μL

  • 模板DNA用量(目的片段≤20kb,25μL反应体系)：5～250ng Genomic DNA；0.1～10ng Plasmid DNA；1～2μL cDNA from RT reaction。
• 推荐的PCR扩增程序：
  

  循环数	温度	时间
  预变性	95℃	1min
  循环1 (5个循环)	95℃	10s
  	65℃	6kb/min
  循环2 (23个循环)	95℃	10s
  	55℃	10s
  	72℃	6kb/min
  末延伸	72℃	2min

  • 在实际应用中，引物TM值（50～70℃）范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28（5+23），如产物扩增亮度不足，则增加循环2的次数到25～28个，通常不宜超过28。
    
  • 如果仍然不能获得良好的扩增结果，则可以改变，循环2中的退火温度为50～65℃（上表中为55℃）。
• 电泳：1%琼脂糖凝胶电泳，上样5μL，电泳结束在紫外灯下检测条带。